Anniek Pheifer werd geboren in Assen en studeerde in 2000 af aan de Toneelschool Amsterdam. In 1996 stond Anniek al op de planken met Vlucht, een Moderne Dans voorstelling. Vanaf dat moment speelde ze in diverse toneelproducties, waaronder De Wraak van Sancho Panza, Driestuiveropera, Huis Clos, Dagboek van een Maagd en Een soort Hades.
In het seizoen 2001/2002 was Anniek Pheifer te zien in The Prefab Four van Orkater, waarmee ze in 2003 op Internationale tour ging. Ook speelde zij dat seizoen de rol van Helena in Orestes bij Het Nationaal Toneel. In 2002 was zij te zien als Juffrouw Tau in Het vuil, de stad en de dood van Rainer Werner Fassbinder. Een jaar later stond ze als Evelyn in The Shape of Things van Neil LaBute. Vanaf 2004 was Anniek te zien in Een Zomerzotheid en in Slippers. Vervolgens acteerde ze bij het Nationale Toneel in Phèdre, Triptiek en Othello. In 2007 en 2008 speelde ze in Shakespeare’s As You Like It.
Sinds 1998 is Anniek ook al op televisie te zien. Haar eerste rol was in de NPS-film Celluloid Blues. Daarna volgde Ina und Leo bij de ARD, Familie Plots, In de Vlaamsche Pot, Baantjer, Russen en tenslotte in 2002 Trauma 24/7. Haar eerste hoofdrol was bij In de Praktijk voor haar weggelegd, waar ze Dokter’s assistente Klaartje werd. In 2001 was ze een jaar lang te zien in Westenwind bij RTL 4.
In 2003 vertolkt Anniek de rol van Desiree in Vara-serie De Band. Hetzelfde jaar speelde ze Hetty in Grijpstra & De Gier op RTL 4. Een jaar later is ze af en toe te zien als ‘de kleine zuster’ in Jiskefet.
In 2001 gingen er maar liefst twee speelfilms in première, waarin Anniek een rol vertolkt. In Costa! speelt zij de rol van Maureen en in Ik ook van jou speelt ze Liesbeth. Ook was Anniek een jaar eerder al te zien in de film Amnesia, en vertolkte te de hoofdrol in Edgar en Joyce, een film voor de filmacademie. In 2002 was ze te zien in Hotel Heimwee en in 2003 speelde ze Pit in telefilm Zinloos, die uitgezonden wordt bij de Vara. In 2005 vertolkt Anniek een rol in de populaire speelfilm Het Schnitzelparadijs. Een jaar later is ze te zien in de spannende Nederlandse thriller Dood Eind.
Bovendien heeft Anniek Pheifer televisiecommercials gedaan voor Iglo (4 maal), Hero en Unox.